Enterokinase (EK) ایک امینو پروٹیز ہے جو ممالیہ کے گرہنی میں موجود ہے اور عمل انہضام میں شامل ہے۔ یہ ڈسلفائیڈ سے منسلک 82–140 kDa ہیوی چین پر مشتمل ہوتا ہے جو آنتوں کے برش بارڈر میمبرین میں انٹروکینیز کو اینکر کرتا ہے اور ایک 35–62 kDa لائٹ چین جس میں کیٹلیٹک سبونائٹ ہوتا ہے۔ مزید برآں، دونوں زنجیریں ایک ہی پیش خیمہ سے اخذ کی گئی ہیں جو ٹرپسن نما پروٹیز کے ذریعے کلیئر ہوتی ہیں۔ EK خاص طور پر امینو ایسڈ کی ترتیب DDDDK کو پہچان سکتا ہے، اور لائسین کی باقیات کے بعد پیپٹائڈ بانڈ کو ہضم کر سکتا ہے۔ rEK کو ریکومبیننٹ پروٹینوں کو صاف کرنے میں فطرت EK سے زیادہ موثر بتایا گیا تھا۔ مزید برآں، لائٹ چین میں EK کی پوری انزائم سرگرمی موجود ہے۔ rBoEK میں دیگر پرجاتیوں کے EK کے مقابلے میں سب سے زیادہ سرگرمی ہے اور اسے بائیو کیمیکل ایپلی کیشنز میں جنگلی طور پر استعمال کیا جاتا ہے۔ rBoEK 6 × His-tag کے ساتھ Ni2+ affinity chromatography کے ساتھ منسلک ہے اور اسے نظام انہضام سے ہٹانے کے لیے ڈیزائن کیا گیا تھا۔
ماخذ
ایسریچیا کولی
سالماتی وزن
تقریباً 28 kDa، ایک واحد نان گلائکوسلیٹڈ پولی پیپٹائڈ چین جس میں 241 امینو ایسڈ ہوتے ہیں، جس میں C-ٹرمینس پر 6 × ہز ہوتے ہیں۔
حیاتیاتی سرگرمی
ظاہری شکل
جراثیم سے پاک مائع۔
تشکیل
50 mM Tris-HCl، pH 8.0، 0.5 M NaCl اور 50% گلیسرول۔
اینڈوٹوکسین
rBoEKL کے 1 EU/ug سے کم، جیسا کہ LAL طریقہ سے طے ہوتا ہے۔
تنظیم نو
استحکام اور ذخیرہ
دستی ڈیفروسٹ فریزر کا استعمال کریں اور بار بار منجمد پگھلنے کے چکروں سے گریز کریں۔- وصولی کی تاریخ سے 6 ماہ، -20 سے -70 °C جیسا کہ فراہم کیا گیا ہے۔- 3 ماہ، -20 سے -70 °C کھولنے کے بعد جراثیم سے پاک حالات میں۔
